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做标准曲线需要注意的问题

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做标准曲线需要注意的问题-昆明倍捷科技有限公司

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目前国际上最流行的免疫检测拟合方式四参数逻辑拟",用这种拟合方式往往能够比较的反映浓度和吸光度的曲线关系,从而进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。

   其实,在一个长的区间内Logistic应该都能拟合得较为理想。但并不是说它就是的。事实上不仅ELISA,其它很多生物学反应都S 线,也都可以Logistic曲线拟合。但建模型是一回事,而用它来定量是另一回事。如果用来定量S形曲线的中间段(较陡处)是比较好的,而两端的 坦部分计算误差会大,有时甚至会很大。

做标准曲线需要注意:

1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。

2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡zui陡段,即曲线几乎成直线的范围内。

3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。

5、标准曲线的样品数一般7个点,但至少要保证5个点。

6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系R至少要大0.98,对于有些实验,至少0.99甚至0.999


2020年4月3日 11:59
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