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常见实验问题

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1. Mmol/l的换算关系?

Mmol/lmMmmol/lμMμmol/lnMnmol/lpMpmol/lfMfmol/l

1M=103mM=106μM=109nM=1012pM=1015fM

2. 实验操作中常说的室温究竟是多少温度?

生物学实验中的室温通常20-25,而不是实际的室内温度。

3. 离心力(×g)和每分钟转速(rpm)如何换算?

转速有离心(×g)和每分钟转速(rpm)两种表示方式,有些离心机设置有rpmxg显示,但普通离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:

g=r×11.18×10-6×rpm2 (r 为有效离心半径,即从离心机轴心到样品中心位置的长度,单位为厘米)

: 转速为3000rpm,有效离心半径为10 cm,则离心力为=10×11.18×10-6×30002=1006.2(×g)

4. 冻存试剂或样品可以室温或37水浴解冻吗?

冻存试剂或样品的解冻,如果时间比较充裕,建议在冰浴或冰水浴上缓慢解冻。如果时间比较着急,大多数冻存的试剂或样品是可以在室温37水浴解冻,但都必须特别小心,必须边观察、边轻轻晃动、边融解。待部分溶解后即需从水浴中取出,确保溶解过程中试剂或样品还是接近0的。如果该试剂或样品在0不会结冻,解冻后可以置于冰浴或冰水浴。

5. 微量液体试剂如何量取?

(1)在开启装有微量试剂的离心管之前,宜先适当离心(500-2000rpm离心5秒即可)。这一步很重要,目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。

(2)微量液体样品宜尽量减少量取次数,以减少不必要的损耗。每多量取一次会损耗0.5-数微升不等的试剂,例如总体积为100μl的试剂,每次量取5μl,通常不太可能量取20次的。

(3)事先计算好样本数量和试剂使用量,一次性量取配制出一定量的工作液后,再分装至各反应管之中。这样可以减少试剂量取的次数。

(4)最好使用经校验的、精密度高、合适量程的微管移液枪及枪头,否则会有超乎想像的误差和损耗。如果是连续量取,每次量取都宜更换枪头,否则会导致第一次吸取后每次的吸取体积明显偏大。

(5)移液枪吸取操作时,宜垂直进入液面数毫米。枪头通常不宜直接插入管底,略低于液面即可,避免试剂过多粘于枪头造成损耗。慢吸,缓慢松开控制按钮,否则液体进入吸头过速会导致少量液体倒吸入移液器内部,导致最终打出时的体积减少。

(6)打出液体时枪头贴壁并有一定角度,慢放,即缓慢打出液体。

6. 对于微量粉末试剂如何操作及使用?

(1)在开启装有微量试剂的离心管之前,宜先适当离心(500-2000rpm离心5秒即可)。这一步很重要,目的是将因运输颠倒而粘于管壁和盖子上的试剂收集至管底以供使用。

(2)对于10mg或以下的微量固体样品,通常不建议再使用天平进行称量,而宜直接按照产品标签上标示的量进行溶液的配制。例如5mg的粉末试剂,很多时候很难从离心管中全部取出来的,但可以在该离心管内全部配制成适当的溶液。对于量略多一些的微量粉末样品,也宜尽量减少称量次数,通常建议每次称量的重量不少于10mg。多次微量的称量可能会由于称量误差导致每次的检测结果产生偏差。对于微量的粉末,如果不涉及溶液保存的稳定性方面的问题,通常建议一次性将所有的粉末试剂按标注的剂量配制完毕。

(3)如果需要称量,请注意使用灵敏度较高的分析天平,使用前进行校准。另外,称量时不建议带乳胶手套(可以戴一次性薄膜手套),以防止乳胶手套和称量纸之间产生的静电影响称量的准确性。称量20-30mg或更小重量时,不可以戴乳胶手套。我们测试过的多种乳胶手套(包括某些品牌的进口乳胶手套),在用乳胶手套接触(摩擦)称量纸后会产生静电,从而会影响称量的准确性,误差可以达到数毫克。而使用聚乙烯材质的薄膜手套,即所谓的PE薄膜手套(类似于保鲜膜材质),接触称量纸则不会产生静电,此时误差较小。

7. 试剂或试剂盒存放时搞错保存温度,是否会影响其使用效果或是否能继续使用?

对于很多试剂虽然要求低温保存,但这是长期保存的条件,很多时候是完全可以4甚至室温短时间保存的。对于具体的某种试剂或试剂盒是否可以继续使用,请设置标准品或阳性对照进行检测,如果标准品或阳性对照的检测结果正常即可继续使用。

8. 试剂已经变色是否还能用?

不能用。试剂变色通常由于试剂的不稳定引起,变色很多时候表明试剂已经变质。对于需要低温或避光保存的试剂一定要低温或避光保存。



2020年4月3日 11:59
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